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伊苏起源的背景设定在一个遭受怪物侵略的传说国度，双子女神失踪，六神官派遣骑士和魔道师展开寻找主人公尤妮卡和尤格分别来自神官世家和神官家族，他们各自拥有独特的性格和目标，一同探索王国的秘密游戏中的角色形象丰富，如神殿骑士团成员祭司魔道士等，每个角色都有鲜明的特点和背景故事在。